Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Media adalah suatu campuran bahan yang mengandung nutrisi untuk membiakan/menumbuhkan, mempertahankan, dan menyeleksi bakteri yang dibiakkan secara invitro (diluar tubuh) sehingga dapat diketahui jenis bakterinya. Adapun jenis-jenis media, yaitu,

• berdasarkan bentuknya: media padat, semipadat, dan cair; 
• berdasarkan susunannya: media sintesis, semisintesis, dan alami; 
• berdasarkan sifatnya: media diferensia, selektif, pengaya, enumerasi, dan penguji.

Media T S I A tergolong media padat (berdasarkan bentuknya), media semisintesis (berdasarkan susunannya), dan media diferensial (berdasarkan sifatnya). Media padat biasanya digunakan untuk mengamati morfologi koloni dan mengisolasi biakan murni. Media semisintetis merupakan media yang tersusun oleh campuran bahan alami dan bahan sintetis. Sedangkan media diferensial adalah media yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba tertentu serta penentuan sifat-sifatnya. Sebagai differensial medium, pertumbuhan bakteri memberikan koloni yang spesifik untuk masing-masing spesies yang didasarkan pada perubahan-perubahan secara kimiawi (Anonim, 2012). Uji Triple Sugar Iron Agar (TSIA) merupakan metode yang digunakan untuk melihat kemampuan mikroorganisme dalam memfermentasikan gula. Medium TSIA mengandung 3 macam gula, yaitu glukosa, laktosa, dan sukrosa. Terdapat juga indikator fenol merah serta FeSO4 untuk memperlihatkan pembentukan H2S yang ditunjukkan dengan adanya endapan hitam. Konsentrasi glukosa adalah 1/10 dari konsentrasi laktosa atau sukrosa agar fermentasi glukosa saja yang terlihat (Anonim, 2012).

Media Triple Sugar Iron Agar

Untuk membuat media TSIA ditimbang bubuk TSI dengan neraca analitik. Bubuk TSI dimasukkan ke erlenmeyer lalu dilarutkan dengan aquades. Larutan media dipanaskan dengan menggunkan kompor listrik dan diaduk hingga larut sempurna. Dicek pH menggunakan pH stick, pH media TSI adalah 7,4. Media dimasukkan ke tabung reaksi, masing-masing 5 ml dengan menggunakan pipet ukur. Tabung ditutup dengan kapas berlemak, aluminium foil, dan diikat dengan benang pulung. Larutan media disterilisasi dengan autoclave. Tabung reaksi diletakkan dalam posisi miring hingga media membeku. Media siap digunakan.

TSI Agar merupakan media untuk melihat kemampuan suatu mikroorganisme dalam memfermentasikan gula. TSIA digunakan untuk pengujian biokimia untuk membedakan beberapa jenis bakteri yang termasuk kelompok Enterobacteriaceae yang bersifat gram negatif dan memfermentasikan glukosa kemudian membentuk asam, sehingga dapat dibedakan dengan bakteri gram negatif lain. Perbedaan ini didasarkan pada pola fermentasi karbohidrat dan produksi H2S pada tabung reaksi. Media ini memiliki 3 gula dalam kandungannya, yaitu glukosa, laktosa, dan sukrosa, dengan konsentrasi 1% sukrosa, 1% laktosa, dan 0,1% glukosa. Konsentrasi ini akan berpengaruh terhadap penggunaan karbohidrat dan keadaan asam yang terbentuk. Indikator pH, yaitu Phenol Red, ditambahkan untuk menunjukkan adanya perubahan pH akibat fermentasi karbohidrat. Adapun komposisi yang terkandung dalam media TSI Agar beserta fungsinya:

• Lab-Lemco powder 3,0 g, sebagai sumber vitamin B bagi mikroorganisme; 
• Yeast extract 3,0 g, sebagai sumber nitrogen; 
• Peptone 20,0 g, sebagai sumber energi/nutrisi bagi mikroorganisme; 
• Sodium Chloride 5,0 g, sebagai pengatur keseimbangan tekanan osmosis/bahan buffer media; 
• Ferri Citrace 0,3 g, sebagai penerima elektron yang dapat memperlihatkan pembentukan H2S oleh bakteri dan juga sebagai bahan buffer; 
• Sodium thiosulphate 0,3 g, sebagai sumber mineral dan energy bagi mikroorganisme; 
• Phenol red 0,5 g, sebagai indikator; 
• Agar, sebagai bahan pemadat media dan tempat tumbuhnya mikroorganisme; 
• Glucose 10,0 g, sebagai sumber karbohidrat yang akan difermentasikan oleh mikroorganisme; 
• Lactose 10,0 g, sebagai sumber karbohidrat yang akan difermentasikan oleh bakteri; 
• Sucrose 10,0 gr, sebagai sumber karbohidrat yang akan difermentasikan oleh bakteri.

Pada prinsipnya, prosedur pembuatan media ini sama dengan media pada umumnya, hanya saja wadah yang digunakan untuk media ini adalah tabung reaksi dan peletakkan tabung reaksi harus miring. Digunakannya tabung reaksi adalah bertujuan untuk mempermudah pengamatan hasil fermentasi karbohidrat dari mikroorganisme, apakah sempurna atau tidak dengan adanya lereng (slant) dan dasar (butt). Sedangkan posisi yang dimiringkan berguna untuk memperluas permukaan untuk tumbuhnya mikroorganisme nantinya.

Pengukuran pelarut merupakan hal penting terutama untuk media berbentuk padat (agar) seperti media TSI. Pelarut dalam hal, ini yaitu aquades, harus dalam takaran yang tepat untuk keberhasilan dari media agar media tersebut tidak terlalu cair maupun padat. Proses pemanasan dilakukan untuk membantu proses pengadukan/pelarutan, agar larutan media tersebut dapat terhomogenisasi dengan sempurna. Jika larutan tidak terhomogenisasi dengan sempurna, komposisi pada media tidak merata maka, dapat menyebabkan kegagalan dalam media tersebut. Penuangan juga merupakan hal yang penting untuk diperhatikan. Penuangan media harus sesuai dengan wadah yang digunakan, tidak terlalu sedikit maupun terlalu banyak. Terlalu banyaknya larutan media yang dituang akan menimbulkan masalah saat media sudah membeku. Jika terlalu banyak, media tidak akan bisa dimiringkan, maka luas permukaan untuk tumbuhnya bakteri akan semakin sempit. Sempitnya luas permukaan ini akan membuat mikroorganisme sulit untuk tumbuh dan membentuk koloni yang spesifik.

Media yang sudah ditumbuhi bakteri

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2012. Uji TSIA. Online. http://id.wikipedia.org/wiki/Uji_TSIA

Anonim. 2011. TSI. Online. http://science-query.com/tag/pada-media-tsia/.

Yusra. 2012. Pengantar Media dan Reagensia. Online. http://yusramitharokerzforever.blogspot.com/2012/06/media-adalah-suatu-campuran-bahan-yang.html.

Mursalim Achmad. 2009. Media dan Reagensia. Online. http://masselekang.blogspot.com/2009/06/media-dan-reagensia.html.