Media Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS)

Media adalah suatu campuran bahan yang mengandung nutrisi untuk pembiakkan/pertumbuhan, mempertahankan dan menyeleksi bakteri yang dibiakkan secara invintro ( di luar tubuh) sehingga diketahui jenis bakterinya ( Edi Sukarman, 2012). Agar TCBS ( Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose) adalah medium selektif yang digunakan untuk isolasi spesies vibrio dari specimen berak ( stool) yang mengaduk bakteri campuran. Agar TCBS juga membedakan produksi karakteristik koloni dari spesies vibrio. Vibrio spp tumbuh kerdil pada media yang dirancang untuk isolasi Salmonella dan Shigella dengan menghasilkan koloni tak berwarna pada MCA. Agar TCBS mengandung Na. sitrat, Na. tiosulfat, dan ox-gall ( 10% larutan yang bersama-sama menghambat pertumbuhan beberapa bakteri gram-positif kokus dan gram – negative batang yang normal ada dalam feses.

Media TCBS

Untuk membuat media TCBS ditimbang bubuk agar TCBS dengan menggunakan neraca analitik. Aquades dimasukkan dalam Erlenmeyer untuk disterlisasi dalam autoclave dengan suhu 121 °C selama 15 menit. Setelah itu, sebelum menggunakan gelas ukur, terlebih dahulu dibilas dengan aquades steril. Aquades steril dituangkan dalam gelas ukur. Erlenmeyer yang sudah melewati tahap sterilisasi dalam oven, dimasukkan TCBS Agar menggunakan spatel, namun spatel harus difiksasi terlebih dahulu, agar tetap steril. Dituangkan aquades steril ke dalam Erlenmeyer yang berisi TCBS Agar. Kemudian diaduk larutan tersebut dengan batang pengaduk hingga homogen. Setelah itu, apabila masih terdapat endapan merah bata pada dasar labu Erlenmeyer maka harus dipanaskan dengan kompor listrik sambil diaduk, hingga muncul sedikit gelembung pada dasar Erlenmeyer. Kemudian dicek pH larutan menggunakan pH stik, dengan pH media yang sesuai adalah pH 8,6 ± 0,2 Sebelum dituangkan dalam plate, Erlenmeyer difiksasi terlebih dahulu lalu dituangkan ke dalam plat. Setelah itu plate diberi label nama dan tanggal pembuatan media. Media TCBS Agar siap digunakan.

Dalam label kemasan bubuk media TCBS merk OXOID tertera 88 gram bubuk media dilarutkan dengan 1L aquades. Jika kita ingin menggunakan 100 ml aquades maka berat bubuk MCA yang harus ditimbang dapat dihitung sebagai berikut :

Pada pembuatan media TCBS ini tidak melalui proses sterilisasi pada autoclave karena dalam TCBS terdapat kandungan atau komposisi thiosulphate yang berfungsi untuk menghambat bakteri lainnya yang tumbuh pada media ini karena media ini termasuk media selektif untuk menumbuhkan satu jenis mikroba tertentu yaitu cholera. Apabila media ini di autoclave maka kandungan thiosulpate akan terpecah dan tidak bisa memproteksi bakteri yang tumbuh pada media tersebut. Karena pembuatan media ini tidak menggunakan proses sterilisasi pada autoclave maka bahan seperti aquadest perlu disterilisasi dalam autoclave dengan suhu 1210 C selama 15 menit, dan alat yang digunakan seperti Erlenmeyer disterilisasi dalam oven. Proses sterilisasi ini bertujuan agar media tetap steril dan tidak terkontaminasi oleh mikroba yang tidak diinginkan. Selain proses sterilisasi alat dan bahan ini ada juga proses fiksasi pada saat penuangan media dalam plate, dimana proses fiksasi ini bertujuan untuk tetap menjaga lingkungan sekitar pada saat penuangan media tetap steril

Kandungan yang terdapat pada TCBS agar antara lain :

• Yeast extract powder  5,0 g
• Bacto peptone 10,0 g
• Sodium thiosulpate 10,0 g
• Sodium citrate 10,0 g
• BTB 0,04 g
• Agar 14,0 g
• Ox Bile 8,0 g
• Sakarose 20,0 g
• Sodium chloride 10,0 g
• Fervic citrate 1,0 g
• TB 0,04 g

Media TCBS yang sudah ditumbuhi bakteri

DAFTAR PUSTAKA

EdiSukarman.2012.MediadanReagensia, online,http://edisukarman.blogspot.com/2012/06 makalah-media-dan-reagensia-media.html

Ciefa.2011.Media Penanaman Bakteri,oline,http://ciefachubble .blogspot.com /2011/10/  media-penanaman-bakteri,html